INTRODUCTION
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Malgré le développement de la chimiothérapie, l'intérêt suscité par les produits naturels ne cesse de s'affirmer.
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Les huiles essentielles sont largement utilisées dans l'industrie alimentaire comme additif de conservation ainsi qu'en industries pharmaceutique et cosmétique.
Le présent travail a été effectué sur un mélange d'huiles essentielles d'eucalyptus, de cinéole, de thym et de lavande diluées dans de l'huile d'olive extra vierge.(sous forme de préparation vendue en pharmacie).
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Nous avons à cet effet entrepris la mise en évidence d'une activité antibactérienne du mélange d'huiles essentielles sur des bactéries Gram + et Gram -.
Du fait que certaines espèces végétales contiennent des substances mutagènes, nous avons envisagé la recherche d'une éventuelle activité mutagène du mélange d'HE à l'aide du test de mutation reverse sur Salmonella tyhlmurium.
MATERIEL ET METHODES
1- Les huiles essentielles:
Elles ont été obtenues à partir des sommités fleuries fructifiées :
- D'eucalyptus maideni récolté à Sejnane
- De cinéole extrait du romarin récolté en Tunisie
- De Thymus capitatus récolté à El Alla (Bizerte)
- De Lavendula Vera (fournie par V. Mane, France,)
2- Les souches bactériennes :
Les souches utilisées sont des bactéries de référence (ATCC) :
- Staphylococcus aureus ATCC 25923
- Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
- Escherichia coli ATCC 25922
- Salmonella typhimurium ATCC
- Salmonella entendis ATCC
- Enterococcus faecalis ATCC 29212
Pour le test de mutation reverse, les souches TA97, TA98, TA100, TA 1535, TA 1537 et TA 1538 dérivées de salmonella typhimurium LT2 ont été utilisées (Maron et Ames, 1983).
3- Milieu de culture :
Le milieu de Mueller-Hinton a été utilisé pour l'étude de l'activité antibactérienne (Ericsson et Sherris, 1971).
4- Méthodes d'étude :
a) Détermination de la CMI et de la CMB
La CMI est la plus petite concentration d'extrait capable d'inhiber la croissance visible du germe après 16 heures d'incubation à 37°C.
La CMI mesure uniquement un effet bactériostatique et ne renseigne pas sur l'état de la population bactérienne.
Les concentrations minimales inhibitrices (CMI) et les concentrations minimales bactéricides (CMB) ont été déterminées par la micro méthode de dispersion d'huile essentielle dans de l'agar 1/1000 par sonication (Len-lisbonne et coll., 1984).
Un volume final de 100µl de milieu de culture, inoculé de façon à contenir 1 à 3 107 cellules/ml, est incubé en présence de 100 µl de la dilution d'extrait à tester dans les puits de micro plaques de culture (96 puits à fond rond).
Par ailleurs, le test d'Ames abouti aux mômes résultats en présence et en absence d'extrait microsomal S9. Cet extrait obtenu à partir de foie de souris renferme la majorité des enzymes nécessaire à la métabolisation.
Il en découle que pour des concentrations d'huiles essentielles qui n'inhibent pas la croissance des souches utilisées, aucune activité génotoxique, du mélange d'huiles essentielles testé, n'a été détectée.
Tableau I : Activités antibactériennes :
Concentrations minimales inhibitrices de la croissance bactérienne en présence du mélange d'huiles essentielles
| Con. Mg/ml |
42,5 |
10,5 |
2,51 |
0,625 |
0,155 |
0,0375 |
| Ent. Faecalis |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
- |
| E.Coli |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
- |
| S. Typhi-murium |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
|
S. enteridis |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
| St. Aureus |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
|
P. Aeruginosa |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
Tableau II : comparaison entre les CMI et les CMB
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Souche |
CMI (mg/ml) |
CMB (mg/ml) |
|
Ent. faecalis |
2,51 |
2,51 |
|
E. Coli |
2,51 |
2,51 |
|
S. typhimurium |
0,155 |
10,5 |
|
S. Entendis |
0,625 |
2,51 |
|
St. aureus |
0,625 |
2,51 |
|
P. Aeuruginosa |
0,625 |
42,5 |
Résultats du test d'Ames avec le mélange d'huiles essentielles
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Révertants his+ par boîte de pétri
TA97 TA 98 TA 100 TA 1535 TA 1538 |
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d'extrait par boîte |
+S9 |
-S9 |
+S9 |
-S9 |
+S9 |
-S9 |
+S9 |
-S9 |
+S9 |
-S9 |
|
660 |
98±0 |
95±1 |
21±1 |
17±1 |
80+0 |
80±2 |
20±1 |
17±1 |
29±2 |
29±0 |
|
800 |
98±2 |
96±0 |
22±1 |
17±0 |
80±0 |
80±0 |
20±0 |
18±0 |
29±2 |
29±2 |
|
1000 |
98±0 |
96±0 |
23±1 |
18±0 |
82±2 |
80±0 |
21±2 |
19±0 |
30±0 |
30±0 |
|
Révertant spontané |
98±2 |
95±0 |
21±2 |
17±2 |
82±2 |
80±2 |
20±0 |
17±0 |
30±0 |
29±2 |
RESULTATS ET DISCUSSION
1- Activité antibactérienne :
Salmonella typhimurlum est la bactérie la plus sensible au mélange d'huiles essentielles testé avec une concentration minimale inhibitrice de 0,125 mg/ml.
Un effet inhibiteur est observé sur la croissance visible de Salmonella entendis, Staphylococcus aureus et pseudomonas aeruginosa à une CMlde 0,625mg/ml.
Escherichiq coli et Enterococcus faecalis sont les moins sensibles avec CMlde=2.51 mg/ml.
Les écarts entre les valeurs du CMI et du CMB pour Salmonella typhimurium, Salmonella enteredis, Staphylococcus aureus et Pseudomonas aeruginosa s'expliquerait par le fait que l'huile essentielle exerce une activité bactériostatique sur ces germes.
Pour Escherichia coli et Enterococcus faecaiis, la CMI a une valeur élevée et équivalente à celle de la CMB. L'huile essentielle aurait donc, à forte concentration, une activité bactéricide que l'on retrouve chez la majorité des huiles essentielles à forte doses.
2- Activité génotoxique :
Le nombre de révertants His+ obtenus après incubation des souches de Salmonella typhimurium en présence de trois concentrations du mélange d'huiles essentielles (660, 800 et 1000 µg/ml), ne représente aucune différence avec le témoin négatif en l'occurrence avec le nombre de révertants spontanés pour chacune de ces souches.
Un volume de 20µl de chaque dilution est ensemencé sur une boîte de Pétri contenant du milieu MH. Après 18 heures d'incubation à 37°C, on compte le nombre de colonies par boîte.
b) Recherche de l'activité génotoxique
Cette recherche a été effectuée selon la technique décrite par Maron et Ames (1983), avec modification du milieu minimum utilisé pour la culture des souches de Salmonella typhimurium LT2.
Après incubation pendant 48 heures à 37°C, on dénombre sur boîte de pétri contenant du milieu minimum supplémenté de traces d'histidine.
CONCLUSION
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Le mélange d'huiles essentielles étudié présente une activité antibactérienne significative sur au moins 3 souches parmi celles testées.
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En revanche, aucun effet mutagène n'a été observé lors de la mise en œuvre du test d'Ames sur le même mélange.
ETUDE DE PROPRIETES BIOLOGIQUES D'UN MELANGE
D'HUILES ESSENTIELLES
HAYDER N., BEN CHIBANI J., CHEKIR-GHEDIRA L.
Laboratoire de Biochimie et de Biologie moléculaire, Faculté de Pharmacie de Monastir.
GHEDIRA K,
Laboratoire de Pharmacognosie, Faculté de Pharmacie de Monastir,
MHALLA H.
Laboratoire AROMA 775, Monastir.
Nous avons conduit l'étude des activités antibactérienne et mutagène d'un mélange d'huiles essentielles, d'eucalyptus, de cinéole» de thym et de lavande diluées dans de l'huile d'olive extra vierge.
Dans le présent travail, nous avons mis en évidence une activité inhibitrice relativement plus importante vis-à-vis de certains germes Gram positif par rapport aux germes Gram négatif. A des concentrations plus importantes, l'activité antibactérienne de ce mélange d'huiles essentielles se manifeste par un effet létal. On parle dans ce cas de concentration bactéricide.
Nous avons également testé la mutagénicité de ce mélange en utilisant le test de mutation reverse décrit par Maron et Ames (1982). Différentes dilutions de ce mélange ont servi à induire 6 souches de Salmonella typhimurium portant des mutations différentes sur le gène de l'histidine (his -). Aucune dilution n'a permis la réversion de ces mutations ni la transformation des bactéries (his -) en bactéries (his +). |
